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CCK-8
CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度的比色檢測(cè)試劑盒。檢測(cè)原理為:WST-8在電子耦合劑1-Methoxy PMS存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜(formazan,參考圖1),生成的甲臜的顏色深淺與細(xì)胞增殖成正比,與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值,間接反映活細(xì)胞數(shù)量。
本試劑盒可用于細(xì)胞增殖測(cè)定,細(xì)胞毒性的檢測(cè),藥物篩選,以及細(xì)胞生長(zhǎng)抑制檢測(cè)等。
CCK-8試劑盒(Cell Counting Kit-8)使用方法
1.以96孔板為例,96孔板中每孔接種100μL的細(xì)胞懸液,在細(xì)胞培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 h。
2.向每孔加入10μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。如果僅測(cè)定細(xì)胞活性,則不需要2~3步驟,直接從第4步操作。
3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(依據(jù)待測(cè)藥物而定)。
4.向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要產(chǎn)生氣泡,輕輕混勻)。
5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育適當(dāng)時(shí)間(一般0.5~2 h)。
6.酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm處的吸光值。
細(xì)胞活力計(jì)算
細(xì)胞存活率*(%)=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100%
抑制率*(%)=[1-(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100%
As:實(shí)驗(yàn)孔吸光度(含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8溶液和藥物溶液);
Ac:對(duì)照孔吸光度(含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8溶液,不含藥物);
Ab:空白孔吸光度(含培養(yǎng)基、CCK-8溶液,不含細(xì)胞、藥物)。
https://www.chem17.com/st325538/product_24800161.html
http://www.life-ilab.com.cn/SonList-2221115.html

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